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酶標儀的工作原理

更新時間:2024-07-24點擊次數:1063

        酶標儀即酶聯免疫檢測儀。是酶聯免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動兩大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。 測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下,用一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。

酶標儀實際上就是一臺變相光電比色計分光光度計,其基本工作原理與主要結構和光電比色計基本相同。光源燈發出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔板中的待測標本。該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號,電信號經前置放大,對數放大,模數轉換等信號處理后送入微處理器進行數據處理和計算,最后由顯示器和打印機顯示結果。微處理機還通過控制電路控制機械驅動機構X方向和Y方向的運動來移動微孔板,從而實現自動進樣檢測過程。而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測,因此省去了X,Y方向的機械驅動機構和控制電路,從而使儀器更小巧,結構也更簡單。
微孔板是一種經事先包埋專用于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內都包埋著相應的抗原或抗體,微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液。
光是電磁波,波長100nm~400nm稱為紫外光,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩,是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光,但對綠色不吸收,反射出來,所以植物呈現為綠色。酶標儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。
隨著檢測方式的發展,擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀,可檢測吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學發光(Lum)。
酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內的任意波長,而濾光片型酶標儀則根據選配的濾光片,只能截取特定波長進行檢測。
中心定位
儀器會自動對酶標孔進行中心定位,中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準確。在對每一個酶標儀進行檢測時,儀器其實要進行35個點的測量,選取最中間的5個點的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來校準由于電壓不穩或燈泡磨損帶來的影響。
用途和其它提示
用于ELISA試劑的測定,廣泛用于各種實驗室,包括臨床實驗室。
質量控制
質量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進行質量控制。
空白校正
有一些試劑盒的說明書將空白孔設置為空氣,其它大多數空白孔的設置是用試劑來設置的,請按照試劑盒的說明書要求進行。
檢測結果的解釋
由于有相當多的因素會影響檢測的結果,如不同的酶標板,檢測試劑的體積,都會造成OD值的不同,因此,只有使用同一酶標板反應的試劑檢測結果才能比較和分析。對結果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進行。



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